蛋白质谱的原理与使用蛋白质谱分析( 四 ) _蛋白

分析物分散在基质分子中并形成晶体。
在结晶过程中，基质分子通过辐射吸收的能量导致能量。
积累并迅速产生热量，升华基质晶体，生成基质并分离。
沉淀物膨胀并进入气相。MALDI产生的大多数质谱是
单电荷离子，所以质谱中的离子与肽和蛋白质有关。
质量之间是一一对应的。MALDI产生的离子经常飞。
理论上，只要飞行管足够长，时间探测器就能探测到。
够了，探测器能探测到的分子数量没有上限，所以质量
光谱学适用于研究大分子，如蛋白质、肽、核酸和多糖。
调查一下。
2.3快原子轰击质谱(Fast Atom )
质谱(FABMS)是一种快速软电离技术。
快速惰性原子发射存在于衬底中的样品，这导致样品离子飞溅。
这种软电离技术适用于强极性和热不稳定性。
它特别适用于多肽和蛋白质的分析。
FABMS只能提供准确的离子质量，因此它可以被确定。
样品的元素组成和分子式。以及fabms-ms系列技术。
这种* * *的应用可以提供样品更详细的分子结构信息，从而
使其在生物医学分析中迅速发展。
2.4同位素质谱技术开发和应用较早。
技术广泛应用于各个领域，但更应该用在医疗领域。
最近几年才开始使用。因为一些致病菌具有特定的分解特性
这种化合物的能力很容易被同位素标记，人们会
人们想到用同位素质谱来检测其代谢产物中的同位素含量。
量来达到检测病原体的目的，还可以同位素质谱。
在医学领域的应用开辟了新的思路。
电泳分离后凝胶上蛋白质的质谱鉴定
电泳分离后，首先用合适的蛋白质处理凝胶上的蛋白质。
将该酶切割成肽段并通过质谱鉴定。有四种样品制备* * *:
3.1凝胶内消化法凝胶内消化法灵敏度高，目前应用广泛。
一般样品制备* * * 。最常用的内切蛋白酶是胰卵。
白色酶。在蛋白质主链的精氨酸和赖氨酸的C端进行。
停下来。文献中有多种凝胶酶消化法，这里介绍其改性。
进入后的Wim方法。
电泳后，用最小体积切下凝胶上的蛋白点。
将凝胶块切成约1毫米的小颗粒，并转移到小离心管中。
加入约5O的100 mmol/l碳酸氢铵溶液洗涤胶体颗粒。
5min后，弃去碳酸氢铵溶液，加入50pJ乙腈使凝胶脱水1O 。
十五分钟。如果胶粒没有完全脱水，用乙腈脱水~次，然后丢弃。
乙腈溶液。将离心管放入真空离心蒸发浓缩器中，加入少许。
加热15分钟，使胶体颗粒完全干燥。50pJ新鲜制剂
加入10毫摩尔DTY石灰和100毫摩尔/升碳酸氢铵溶液用于离心。
在试管中，胶体颗粒被水合。在56℃下加热30分钟，以减少样品并将其丢弃。
取出DTr溶液，加入乙腈，静置15分钟，然后在Speed Vac中跟踪。
加热并干燥15分钟，并添加50升55 mmol/L碘乙酰胺。
基于烷基化半胱氨酸残基的100毫摩尔/升碳酸氢铵溶液。
巯基将其置于室温下的暗室中20分钟，抛弃阳光明媚的夜晚，并添加
将50pJ乙腈放置15分钟，并在Speed Vac中干燥。添加20升
将胰蛋白酶溶液在4℃放置45-60分钟，以使胶体颗粒复水。
加入1O-2o碳酸氢铵溶液覆盖胶粒，37cI=保温1小。
之后，将其放置过夜，所得溶液用于质谱分析。
3.2电洗脱后溶液中的酶水解；电洗脱来自电泳后的凝结。
从橡胶中回收蛋白质的经典。一般蛋白质质量大于0 。
01毫摩尔。将含有SDS的凝胶与MALDI TOF MS分析相结合。
你可以分析亚微摩尔到毫摩尔的蛋白质。束河马歇尔等。用还是不用？

蛋白质谱的原理与使用 蛋白质谱分析( 四 )

蛋白质谱的原理与使用蛋白质谱分析( 四 )