汉坦病毒( 三 )

文章插图
汉坦病毒疫苗与抗病毒研究近年来HFRS疫苗的研製取得了较大的进展，有些类型的疫苗已经国家批准生产使用，有的已进入临床观察中，有的正在试验室研製和检测中。中国已经研製成功并试生产的3种单价灭活疫苗经大面积人群接种观察，安全性较好，并具有较好的血清学和流行病学效果。近期(基础免疫后1年)和中期(基础免疫后2年)平均保护率，Ⅱ型地鼠苗分别为97.81%、88.73%；Ⅰ型上海沙鼠苗分别为94.08%、91.72%；Ⅰ型天元沙鼠苗均为100.00%；Ⅰ型鼠脑苗分别为88.45%、100.00% 。灭活双价沙鼠肾疫苗进行的Ⅱ期临床试验，总反应率为2.5%，3针后免疫萤光抗体阳转率100.00%，中和抗体阳转率87.6%(针对Ⅰ型病毒)和96.3%(针对Ⅱ型病毒)，单一血清型阳转率100.00%，两种血清型同时阳转率75.00% 。韩国生产的汉坦病毒灭活鼠脑疫苗(Hantavax)的研究表明，基础免疫1年后免疫萤光试验和高密度颗粒凝集试验检测血清抗体阳性率分别为42.5%和45%，中和抗体阳性率13% 。基础免疫1年时加强免疫后，血清抗体阳性率92%，中和抗体阳性率升高至80% 。此外，D.Koletzki等构建了携带汉坦病毒核蛋白基因的B肝病毒嵌合体，在使用和不使用佐剂的条件下免疫动物，都产生针对B肝病毒和汉坦病毒的特异抗体。K.Kamrud等对裸病毒DNA和甲病毒表达的汉坦病毒进行了评价。採用噬菌体呈现技术，C.de Carvalho Nicacio等、Tuomas Heiskanen等和梁米芳等分别研製了抗汉坦病毒的重组抗体，为未来HFRS的免疫治疗开闢了前景。W.E.Severson等报告了病毒唑对汉坦病毒複製的影响。

文章插图
汉坦病毒分子生物学和细胞生物学各国学者在多方面进行了汉坦病毒的分子生物学和细胞生物学研究。T.M.Welzel等和白雪帆等採用基因片段噬菌体表面呈现技术，研究了汉坦病毒单克隆抗体识别位点。E.Mackow等製备了针对桿状病毒表达的SN病毒核蛋白的单克隆抗体，用于HPS相关病毒的血清学分型研究，并通过NY-1病毒核蛋白突变研究了单克隆抗体的识别位点。J.W.Hooper等用含有汉坦病毒反基因组的质粒DNA转染Vero-E6细胞后，可以用免疫沉澱的方法检出所表达的NP和G1、G2糖蛋白，但不能用生化和功能分析检出聚合酶蛋白，也未检出感染性病毒。B.Anheier等的研究表明，汉坦病毒G1、G2聚合物在高尔基体的定位由G1蛋白引导，G2蛋白稳定分子定位，G1蛋白胺基酸的变化可能改变G1结构，进而影响聚合物的形成。E.V.Ravkov等的研究表明，BCC病毒核蛋白与肌动朊纤维相互作用，可能在汉坦病毒的装配和/或释放过程中起重要作用。B.J.Meyer等採用Northern杂交、RNase保护试验、RT-PCR、克隆测序等方法，对汉坦病毒在Vero-E6细胞内的持续感染进行了研究。

文章插图
实验室诊断流行病学智利1995年发现首例HPS病人，1995年10月至1997年7月发病仅8例，1997年10～12月发病20例，涉及全国11个地区，平均发病年龄29.7岁，病死率61% 。病毒基因分析表明，发病主要由Andes病毒引起。作者认为，HPS病例的增加与当地汉坦病毒宿主动物数量的增加有关。俄罗斯1978～1996年共发生HFRS91 639例，分布于89个行政区中的61个，其中96.4%来自俄罗斯欧洲部分，3.6%来自亚洲部分，年平均死亡率分别为4.0/10万和0.6/10万。血清学和基因分型表明，俄罗斯至少存在6种血清型的汉坦病毒：HTN、PUU、SEO、TUL、KRB、TOP 。比利时1995年10月至1996年12月发生HFRS 199例，季节分布表现为冬春季的小高峰和夏秋季的大高峰，病人主要为PUU血清型感染。加拿大截止1997年11月共发生HPS 21例，分布于3个西部省份，病死率33%，流行病学调查表明全国都有携带病毒的宿主动物分布，而HPS发病与接触鼠类的机会有关。日本从17个海港中的16个和3个飞机场中的2个检出宿主动物携带汉坦病毒，作者提出应建立监测体系并採取相应预防措施，检查人群病毒感染率。生态学气候、鼠类栖息地条件、鼠类繁殖强度、种群构成等因素的变化影响鼠密度，而宿主动物病毒感染率随着时间和地点的不同不断发生变化。不同的鼠密度、宿主动物病毒感染率和与人群接触的机会，影响疾病的暴发或散发。T.S.Chiueh等对台湾进行的血清流行病学研究表明，当地虽然没有确诊的HFRS病人，在宿主动物中却存在汉坦病毒的感染，在与鼠类接触的职业人群和慢性肾衰及发热病人中，血清抗体阳性率较高。C.Ahlm等报告瑞典北部野生驼鹿具有较低的汉坦病毒感染率。Yun-Tai Lee等发现，韩国蝙蝠、棕头鸦雀携带PUU病毒。O.A.Alexeyev等的研究表明，在PUU抗体阳性欧洲棕背中，大部分(74%)不能检出病毒RNA或抗原，也不具有感染性。此外，为表示汉坦病毒株对Vero-E6细胞适应能力与宿主动物种类的关係，L.Ivanov等用鼠肺标本汉坦病毒抗原滴度、病毒分离成功率、病毒分离天数等计算适应指数，黑线姬鼠为0.32，大林姬鼠为0.17，东方田鼠为0.10，棕背为0.06 。临床多项报告对HFRS和HPS的后遗症进行了调查，研究表明两种疾病的恢复病人与健康人比较，分别存在肾脏或肺功能的异常。M.Howard等对患有HPS的孕妇进行了调查，结果表明患有HPS的孕妇预后与其他HPS患者相同，患有HPS孕妇的胎儿与其他患有成人呼吸窘迫综合徵的孕妇的胎儿差异不大，研究中没有发现SN病毒在人类垂直传播的现象。病理与免疫反应HL Van Epps等研究了针对HTN病毒感染的人T淋巴细胞的反应，包括针对核蛋白或G1蛋白的和T细胞系，部分针对核蛋白的 T细胞系与无名病毒核蛋白有交叉反应，而针对核蛋白或G1蛋白的 T细胞系与无名病毒蛋白没有交叉反应。这种引起不同汉坦病毒病(HFRS和HPS)的毒株，人T细胞系的交叉反应在病理研究和疫苗研製中具有重要意义。F.A.Ennis等进行的另一项研究，从HPS病人血中分离和 T细胞系，有些细胞系识别的区域在不同汉坦病毒株间相对保守，但有些T细胞系不能识别汉坦病毒单一的胺基酸改变，另一些T细胞系能识别关係较远的分离株，如安第斯和普马拉病毒的相应区域。C.Mansilla等对安第斯病毒致死病人尸检结果表明，Andes-HPS和SNV-HPS引起的病理改变和病毒抗原分布相似，但Andes-HPS病例发现有充血性心肌炎和Ⅱ型肺单核细胞活性，并有较多的肝染色。M.Bharadwaj等从Andes-HPS病人气管中检出病毒RNA，认为安第斯病毒可能在人-人间传播。还有报告研究了血组胺和缓激肽、类脂过氧化物、血管加压素、溶酶体、红细胞膜腺苷三磷酸酶等在HFRS病理改变中的作用。S.C.St Jeor等研究了SN病毒在鹿鼠体内的持续感染，感染后几周至几个月内，随着抗体水平的增高，血清中病毒消失，其他组织中病毒减少。Karen L.Hutchinson等研究了BCC病毒在刺毛棉鼠体内的感染，感染后前几周，定量PCR在除血液外的各组织中检出病毒cRNA，以后病毒cRNA减少，感染5个月后只在脑内检出；感染后1周血液中存在感染性病毒，2周时达高峰，3周时显着减少；感染后5个月在肾上腺、肝、肾、睪丸仍可低水平检出感染性病毒；感染后70d内尿中可分离到病毒；感染14d后可检出BCC抗体。杨守敬等的研究表明，HFRS的休克和出血引起的局部缺血可以导致热休克反应，在病人组织中表达72KD和73KD的热休克蛋白，保护组织细胞免于损伤。他们的另一项研究，通过增生细胞核抗原以及细胞分裂中波形蛋白抗体的检测表明，在HFRS组织损伤过程中，存在细胞的再生和DNA的修复，修复程度与损伤的严重程度有关。