Nanoprobes 艾美捷高密度可靠的预包埋Nanogold标记 _缓冲

艾美捷预包埋标记是一种非常可靠的包埋前免疫金方法。
NINDS的Susan Cheng博士和合作者已经改进了他们的包埋前程序，使用?-Fab'和HQ银进行J均匀、一致和可靠的包埋前标记。
用户在使用该方案时发现了：
与其他方法相比，金标记的密度更高。
非常高的特异性。
J大的分辨率。
和他的同事已经描述了这个程序，据报道，与其他方法相比，这个程序可以得到明显更高密度的银增强的金纳米粒子。下面是一个结果的例子。
图：?:-Fab'山羊抗兔IgG（目录#2004）标记大鼠大脑中的K+通道Kv2.1亚基，然后用HQ银（目录#2012）增强。注意免疫染色的高密度和特异性，甚至阐明了亚单位定位在细胞膜的细胞质侧和高尔基体的外堆；轴突和终端明显是阴性的。由J.Du, J.-H. Tao-Cheng, P.Zer.完成的工作。Tao-Cheng, P. , and C. J. , NIH完成。见神经科学， 84 ， 37-48（1998）Bar 1微米。
艾美捷DPPE-材料和试剂：
磷酸钠缓冲液。0.1M磷酸钠， pH值调整为7.4 。
磷酸盐缓冲液（PBS）缓冲液。0.02M磷酸钠缓冲液与0.15M氯化钠， pH值调整为7.4 。
磷酸盐缓冲盐水（PBS）缓冲液。0.02M磷酸钠缓冲液加0.15M氯化钠， pH值调至7.4 ，含(a)5%牛血清白蛋白和0.05至0.1%叠氮钠；和(b)1%山羊血清和0.1%NaN3 ， 3-4 X 5 min
戊二醛和多聚甲醛。
HQ银试剂（）。
去离子水或蒸馏水。
艾美捷DPPE-协议：
用以下方法之一固定约45分钟（对于单层培养物）。(1)在0.1M磷酸钠缓冲液中的4%多聚甲醛， pH7.4 ，或(2)在0.1M磷酸钠缓冲液中的2%多聚甲醛与0.05% - 0.1%戊二醛， pH7.4 。
用0.1M磷酸钠缓冲液， pH7.4清洗， 3次，每次5分钟。
用含5%山羊血清、0.1%叠氮钠和0.1%皂素的PBS阻断和通透细胞1小时。
用含有5%正常山羊血清、0.1%皂素和0.1%叠氮钠的PBS制成的抗体在室温下孵育1小时。
用含1%山羊血清和0.1%叠氮钠的PBS洗3-4 x 5分钟。
在1毫升含有1%山羊血清和0.1%叠氮钠的PBS中，用标记的Fab'抗兔或小鼠（取决于一级抗体）二级抗体结合物（4升）孵育1小时，室温下。
【Nanoprobes 艾美捷高密度可靠的预包埋Nanogold标记】用含有1%山羊血清和0.1%叠氮钠的PBS清洗，一次，然后用PBS清洗，两次。
用PBS中的2%戊二醛固定30分钟。
用PBS洗3次。储存过夜。
第二天用水彻底清洗。
进行银增强（HQ银增强试剂盒， , NY）。
用水清洗。在LM下仔细检查；只对有希望的标本进行EM处理。
在0.1M磷酸盐缓冲液中清洗， pH7.4 。
在0.1M磷酸盐缓冲液中加入0.2%的OsO4 ， 30分钟。
清洗，用乙酸铀染色，在乙醇中脱水，然后嵌入。