涂布平板法 _生活百科

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涂布平板法【涂布平板法】微生物学实验中的一种操作方法。由于将含菌材料现加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且採用稀释倒平台法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。
基本介绍中文名：涂布平板法
外文名：spread plate method
特徵稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特徵设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品製成均匀的系列稀释液，儘量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物製品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。

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左：稀释涂布平板法；右平板划线法实验器材1．活材料：苏云金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis）菌剂。2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基3．器材：90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等。实验方法（提示：10-1为10的负一次方，即0.1；10-2为10的负二次方，即0.01）1．样品稀释液的製备準确称取待测样品l0g ，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20min ，使微生物细胞分散，静置20-30s ，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml ，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1ml ，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，製成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液。用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，採用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，採用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，採用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，採用10-2、10-3、10-4稀释度。2．平板接种培养平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。（1）混合平板培养法将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码，每一号码设定三个重複，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液各1ml放入编号10-9的3个平板中，同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3个平板中，再吸取10-7稀释液各lml放入编号10-7的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养液，轻轻转动平板，使菌液与培养液混合均匀，冷凝后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。（2）涂抹平板计数法涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设三个重複）。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20—30min ，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。