抑制性差减杂交 ssh

ssh(抑制性差减杂交)【抑制性差减杂交 ssh】抑制性差减杂交（ suppression subtractive hybridization ， SSH），抑制性差减杂交（ SSH）是1996 年由俄国科学院、加州大学旧金山分校和CLONTECH 公司联合开发的技术。
抑制性差减杂交（ suppression subtractive hybridization ， SSH），抑制性差减杂交（ SSH）是1996 年由俄国科学院、加州大学旧金山分校和CLONTECH 公司联合开发的技术，它能够快速、简便地分离和鉴定不同细胞系、不同组织或同一细胞系、同一组织在不同条件下的差异表达基因。SSH 技术的主要原理是以抑制性PCR 为基础的cDNA 差减杂交。当使用与2 个不同接头序列互补的引物进行PCR 扩增时，无差异表达基因的cDNA 由于两端存在着反向重複序列，退火过程中容易产生类似髮夹的互补结构，无法作为模板与引物配对，从而达到选择性地抑制非目的基因的扩增，而差异表达基因的cDNA 则可以有效扩增的目的。同时，运用杂交二级动力学原理，使得在丰度上有差别的单链cDNA ，在变性后再复性的过程中达到均一化富集，从而消除目的基因间的丰度差异。SSH 技术操作的流程如下： ①分别提取2 种不同细胞（受试方： Tester；驱动方： Driver）的mRNA并反转录为cDNA； ②分别用RsaI 酶切割处理后，将Tester cDNA 分为相等的2 份，并与2 个不同序列的接头连线； ③将上述加接头的cDNA 分别与过量的Driver cDNA 混合，变性后退火杂交； ④两轮抑制性PCR 扩增与接头相连的Tester cDNA 分子； ⑤PCR产物克隆纯化，构建差减文库并对文库进行筛选、验证。