软琼脂法 _生活百科

软琼脂法所谓克隆化是指使单个细胞无性繁殖而获得该细胞团体的整个培养过程。克隆化的方法很多，其中就有软琼脂法。软琼脂法材料：a.HT培养基（双倍浓度）。b.用0.15mol/LNaCl配製的2.0%琼脂糖：称取2.0g细胞培养用琼脂糖，悬浮于100ml0.15mol/LNaCl，121℃高压灭菌15分钟，分装10ml小瓶，冷却后4℃保存。c.小鼠腹腔细胞。d.灭菌平皿。e.45℃水浴。f.活力很好的杂交瘤细胞。方法：a.在培养皿中製备饲养细胞（小鼠腹腔细胞）单层。b.临用前将2.0%琼脂糖生理盐水溶液与等量双倍浓度的HT培养液混匀，配成1%琼脂糖培养液，45℃水浴中温育。c.吸去平皿上层培养液，加入1%琼脂糖培养液3ml，室温10分钟。d.取杂交瘤细胞悬液1ml，加入1%琼脂糖培养液1ml混匀，铺于上层。e.37℃、7.5%湿润培养7-14天；克隆生长至2mm时，用毛细吸管吸出克隆，直接转种于含有饲养细胞的24孔板，扩大培养。f.吸取上清，检测抗体，阳性孔可继续克隆化，或扩大培养、冻存。