保种！农业农村部印发“国家级地方猪遗传材料采集保存工作实施方( 三 )

(二)供体请求
符合品种特性、特征;三代以内无血缘关系，系谱清晰;健康、必检疾病为阴性。
(三)细管标记及包装
应在细管上标明保种场(保护区)建设单位代码、品种代码、供体号和生产日期。保种场(保护区)建设单位代码用汉语拼音大写首字母表示，品种代码为该品种汉字的汉语拼音大写首字母，生产日期按年月日次序罗列，年月日各占二位数字，年度的后两位数组成年的二位数，月、日不够二位的，月、日前分辞加“0”补充为二位数。
CQXK为重庆畜牧科学院代码，RCZ为荣昌猪的品种代码，11003为该公猪号，120525为2012年5月25日的生产日期。
细管装入指形管，指形管上标记供体猪号、寒冻精液数量及生产日期。再用灭菌纱布袋将装有寒冻精液的指形管包装起来，一个灭菌纱布袋装一头猪的寒冻精液，并有标签附在纱布袋上，放入液氮中保存。纱布袋标签请求标记如下内容：袋号、品种、供体猪号、寒冻精液数量、解冻后精子的活力。
(四)质量检测
1. 抽样数量及请求
抽取总样本量的2%进行质量检测，检测合格率请求达到80%以上。
2. 指标
(1)0.25mL剂型寒冻精液
每支剂量≥0.18mL;活力≥30%;精子畸形率≤20%;每支前进运动精子数≥2.5×107;每支细菌菌落数≤800个。
(2)0.5mL剂型寒冻精液
每支剂量≥0.40mL;活力≥30%;精子畸形率≤20%;每支前进运动精子数≥5.0×107;每支细菌菌落数≤1600个。
二、体细胞寒冻保存
(一)数量请求
每个保种场(保护区)的每个品种公猪不少于12头，涵盖所有家系;母猪不少于25头，每个个体体外培育原代或第1代细胞6管，每管1mL，用1.5mL或2.0mL冻存管包装，细胞密度为1×105/mL以上。
(二)供体请求
符合品种特性、特征;三代以内无血缘关系，系谱清晰;健康、必检疾病为阴性。
(三)寒冻管标记及包装
冻存管上标记编号、品种汉语名称或代码，细胞名称或代码、性辞、培育代数、冻存日期。用灭菌纱布袋将冻存管包装起来，一个灭菌纱布袋装2-3头猪的冻存管，并有标签附在纱布袋上，放入液氮中保存。纱布袋标签标伎捶种、供体猪号、冻存管数量。
(四)质量检测
1.抽样数量。抽取总样本量的4%进行质量检测，检测合格率请求达到70%以上。
2.指标。细胞密度不低于1×105个/mL;细胞活力80%以上;支原体检测为阴性。
三、耳组织及基因组DNA样寒冻保存
每个保种场(保护区)每个品种采样数量40头(对所有公猪家系所有进行采样，繁殖公猪、繁殖母猪各1头，和后备公猪和后备母猪各1头，且后备猪避免全同胞关系) 。每个品种每个个体采集3份耳样，每份耳组织样不少于2克(用2 ml冻存管保存)，冻存管上详细标注品种、耳号、性辞、采样日期、场地等关键信息。耳样采集后立即置于液氮中保存。
四、肠道菌群寒冻保存
(一)数量请求
每个保种场(保护区)每个品种公猪不少于10头，母猪不少于50头，每头猪采集粪便样本2份(每份2克) 。
(二)供体请求
60日龄后备猪，符合品种特性、特征;三代以内无血缘关系，系谱清晰;近一个月没有使用抗生素、食欲正常、体重达该品种60日龄阶段标准。
(三)冻存管标记及包装
冻存管上标记编号、品种汉语名称、性辞、采样日龄、采样日期。
(四)采样请求和主意
1.采样请求
(1)每头猪采集清新粪便样本2份(每份2克)，其中一份用2.0 mL冻存管包装后立即投入液氮或-80℃保存，另一份用5.0mL冻存管取1克清新粪便置于3.0 mL 含20%甘油和5%蔗糖的保护液中，液氮或-80℃保存。