有人说,我们的这碗饭不好吃,有酸、有辣也有苦;也有人说,我们的这项工作不好干,没职、没权、没钱;我们曾有过被人误解的痛苦,也有过遭人嘲笑的尴尬,但尽管如此,我们仍然不计名利得失,不辞辛苦,努力实践着全心全意为人民服务的宗旨,在平凡的岗位上,书写着无悔的人生 。
我自豪,我感动,我赞叹,因为我是光荣的司法行政人 。
如果你是一滴水,就能折射出太阳的光芒;如果你是一缕风,就能吹来花的芬芳;如果你是一抹霞,就能将七彩的光辉洒满人间的每个角落!这就是你真实的写照:光荣的司法行政人!
“为什么我的眼里常含泪水,因为我对这土地爱得深沉”,多难兴邦,否极泰来,当我们伟大的中华民族正以崭新的姿态昂首走向未来的时候,她那坚实有力的步伐里有一群默默奉献的司法行政干警的身影 。他们以不断创新的动力,以决胜永恒的执着,用公平染成国徽永不减褪的色彩,用正义的生命泉水,书写司法行政的不朽传奇 。作为司法行政大家庭中的一员,我将沿着他们的足迹,追寻着他们的梦想,为构建社会主义和谐社会奉献自己无悔的青春 。
谢谢大家!
one component system 单因子系统 是什么
文章插图
单组成因素生产系统(one-component system):
所有的组成成分都集中在生产细胞中 。经典的反转录病毒生产系统就是由产病毒细胞(VPC)组成,重组反转录病毒由VPC细胞不断分泌至培养上清中 。这种生产系统操作最为简单,但是往往产量不高或不稳定 。采用这种策略,需要将重组病毒产生所需要的所有元件都稳定地置于生产细胞中 。由于许多病毒基因产物本身对细胞有破坏作用或不能在细胞中稳定表达,因此这种策略在许多病毒载体的生产中难以实施 。
第一节 病毒载体产生的原理
病毒载体的产生建立在对病毒的生活周期和分子生物学认识的基础之上 。研究病毒载体首先要对病毒的基因组结构和功能有充分的了解,最好能获得病毒基因组全序列信息 。病毒基因组可分为编码区和非编码区 。编码区基因产生病毒的结构蛋白和非结构蛋白;根据其对病毒感染性复制的影响,又可分为必需基因和非必需基因 。非编码区中含有病毒进行复制和包装等功能所必需的顺式作用元件 。
各种野生型病毒颗粒都具有一定的包装容量,即对所包装的病毒基因组的长度有一定的限制 。一般来说,病毒包装容量不超过自身基因组大小的105~110% 。
基因重组技术的发展使病毒载体的产生成为可能 。最简单的做法是,将适当长度的外源DNA插入病毒基因组的非必需区,包装成重组病毒颗粒 。比如,本实验室曾将4.5kb的lacZ基因表达盒(CMV-lacZ-polyA)插入HSV1病毒的UL44(糖蛋白C)基因的XbaI位点中,病毒基因组的其余部分不改变,构建成重组病毒HSV1-lacZ100(吴小兵等,1998) 。由于UL44基因产物对于HSV病毒在培养细胞中产毒性感染是非必需的,因此,该重组病毒可以在细胞中增殖传代 。用这种重组病毒感染细胞,能将lacZ基因带入细胞并高效表达 。用同样的方法,将AAV-2病毒的rep和cap基因片段(4.3kb)插入HSV1病毒的UL2(编码尿嘧啶DNA糖基化酶)或UL44(编码糖蛋白C)基因中,构建成具有提供重组AAV载体复制和包装所需的全部辅助功能的辅助病毒rHSV-rc(伍志坚等,1999) 。
然而,这样的重组病毒作为基因转移载体有许多缺点 。首先,许多野生型病毒通过在细胞中产毒性复制而导致细胞裂解死亡;或带有病毒癌基因而使细胞发生转化 。因此必须经过改造使其成为复制缺陷性病毒并且删除致癌基因后才能用于基因治疗 。其次,插入外源DNA的长度受到很大限制,尤其对于基因组本身较小的病毒如腺病毒伴随病毒(AAV,4.7kb)、反转录病毒(8~10kb)、腺病毒(36kb),如果不去除病毒基因,可供外源DNA插入的容量就十分小 。因此,必须删除更多的病毒基因以腾出位置插入较大的外源DNA 。为了增加病毒载体插入外源DNA的容量,除了可以删除病毒的非必需基因外,还可以进一步删去部分或全部必需基因,这些必需基因的功能由辅助病毒或包装细胞系反式提供 。
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